Introduction : la RAM est un problème de santé publique mondial qui menace l'efficacité des agents antimicrobiens utilisés pour traiter les infections causées par des bactéries, des virus, des champignons et des parasites. L’objectif était d’évaluer les connaissances, attitudes et pratiques des praticiens de laboratoire vis-à-vis de l’utilisation des antimicrobiens et la RAM. Méthodologie : Il s’agissait d’une étude transversale, descriptive et analytique, sur une période de 9 mois allant de novembre 2024 à août 2025. Les données de l’étude ont été recueillies à l’aide d’un questionnaire administré sous deux formats : papier et électronique (logiciel Kobocollect). Résultats : Au total, 52 praticiens ont été inclus pour l’analyse quantitative dont 8 parmi eux pour l’analyse qualitative. La moitié des praticiens avaient une connaissance de la RAM (50%, n=26). Concernant les attitudes 3/4 des participants estimaient qu’ils étaient inadaptés d’acheter les même antimicrobiens pour les mêmes symptômes. La moitié des praticiens déclaraient réaliser régulièrement des antibiogrammes. Selon les praticiens interviewés, l’abus d’antibiotique et de la RAM constitue un problème préoccupant pour le système de santé. Conclusion : Pour relever ce défi, il faut renforcer les capacités des laboratoires, améliorer la diffusion des directives nationales et promouvoir une utilisation rationnelle des antimicrobiens pour une prise en charge efficace de la RAM au Niger.